九九久久精品免费观看,蜜臀av午夜福利在线,后入内射无码人妻一区,六月婷婷精品视频在线观看,一区二区三区婷婷中文字幕,51精品免费视频国产专区,JIZZJIZZ国产,国产极品女主播国产区,亚洲一区二区三区国产精品 ,免费一看一级毛片

作為分子生物學中逐步興起的RNA表觀遺傳學領(lǐng)域，RNA化學修飾在多種疾病中的作用被逐步闡明。其中，m⁶A修飾作為豐度最高的修飾之一已被證實可影響多種疾病中的關(guān)鍵致病基因組的轉(zhuǎn)錄及表達。ALKBH5作為m⁶A修飾的擦除器蛋白，其可通過調(diào)控RNA中m⁶A修飾從而影響疾病進展，在急性髓系白血病中，ALKBH5的過表達導致下游致癌基因轉(zhuǎn)錄組穩(wěn)定性增強進而導致致癌蛋白過表達最終導致癌癥惡性進展。目前通過化學小分子干預調(diào)控其活性仍然存在巨大挑戰(zhàn)。

圖1 18l的ALKBH5抑制活性及共價作用機制驗證

Cys200殘基作為ALKBH5特有的非催化共價位點，位于ALKBH5的ssRNA底物結(jié)合口袋附近，研究人員設(shè)想通過靶向該位點進行共價修飾，從而干擾底物與ALKBH5結(jié)合，起到選擇性活性抑制作用。通過前期篩選及構(gòu)效關(guān)系研究，研究人員得到了以馬來酰亞胺作為共價彈頭的優(yōu)選化合物18l（ALKBH5 IC₅₀ = 620 nM）。通過多種體外實驗，證實了18l是通過共價修飾Cys200抑制ALKBH5酶活性，且該種修飾可阻止底物結(jié)合ALKBH5。此外，對于FTO和多種Cys蛋白酶，18l具有對ALKBH5的良好選擇性。

圖2 18l在血液瘤細胞中的抗腫瘤作用研究

在體外驗證化合物18l對ALKBH5的抑制活性后，研究人員對化合物的細胞水平活性進行了測試。結(jié)果表明化合物18l可以抑制AML細胞增殖（NB4 cell IC₅₀ = 630 nM），促進AML細胞凋亡、分化為正常細胞、阻滯細胞周期，并抑制細胞內(nèi)ALKBH5介導的信號通路表達，此外，18l可提升NB4細胞內(nèi)RNA中m⁶A水平，表明化合物可在胞內(nèi)抑制ALKBH5。

圖3 18l的靶向性及作用機制研究

為驗證18l的酶水平ALKBH5抑制活性與抗AML細胞表型的關(guān)聯(lián)性，研究人員進行了非修飾的靶向性驗證以及基于ABPP的化學蛋白質(zhì)組學研究。在非修飾性實驗中，18l可改變ALKBH5的蛋白酶耐受性、熱穩(wěn)定性從而證明了化合物的胞內(nèi)在靶性。ABPP蛋白質(zhì)組學實驗中，基于18l的化學探針可結(jié)合ALKBH5，質(zhì)譜結(jié)果證實了18l在AML細胞內(nèi)可結(jié)合ALKBH5。

圖4 18l的體內(nèi)抗腫瘤藥效學研究

最后，研究人員在AML細胞小鼠異種移植瘤模型中進行了18l的體內(nèi)抗腫瘤藥效學研究，在1 mg/kg和2.5 mg/kg給藥劑量下，18l均可有效抑制腫瘤生長，抑瘤率分別為66.3%和76.8%，且動物體重未出現(xiàn)明顯下降，展現(xiàn)出了該化合物的良好體內(nèi)藥效。

柳紅/楊財廣/李淳樸團隊報道了一種靶向Cys200共價抑制ALKBH5的小分子18l。該化合物表現(xiàn)出強效的ALKBH5抑制活性和較好的選擇性，在針對AML的體外和體內(nèi)藥效學研究中顯示出優(yōu)秀的抗腫瘤作用。通過CETSA、DARTS以及基于ABPP的化學蛋白質(zhì)組學等多種化學生物學手段進行了深入的作用機制驗證，闡明了ALKBH5抑制劑18l發(fā)揮抗AML作用的機制，為RNA表觀遺傳領(lǐng)域的精準化學調(diào)控提供了新的指導思路。

中國科學院上海藥物研究所柳紅研究員、楊財廣研究員、李淳樸研究員為本論文共同通訊作者，中國科學院上海藥物研究所博士研究生吳恒搏、賴淦強、程瑞翔為本論文共同第一作者。該項工作得到了中國科學院上海藥物研究所周虎研究員的支持。該項研究獲得了國家重點研發(fā)計劃、國家自然科學基金、中國科學院青年創(chuàng)新促進會的資助。